辣椒遗传转化（二）：农杆菌准备

1⃣️培养基的配制与灭菌

配制YEP液体及固体培养基，共培养基，待灭菌。包扎好离心管、移液枪枪头，将实验物品放入高压蒸汽灭菌锅灭菌，121℃灭菌20min。将灭菌后的物品放进超净工作台内待用。

2⃣️倒培养基

开启超净工作台紫外灯，紫外照射不少于20min，照射结束，关闭紫外灯，通风不少于10min。将已灭菌的培养基用75%乙醇消毒后放到超净工作台中，待YEP培养基冷却后，在固体YEP培养基中加入50mg/L Kan和20mg/L Rif，摇晃均匀，并将固体YEP培养基和共培养基倒入一次性培养皿中，静置冷凝待用。

3⃣️活化农杆菌

开启超净工作台紫外灯，紫外照射不少于20min，照射结束，关闭紫外灯，通风。冰盒取冰后放上铝块，取农杆菌置于铝块上，冰盒消毒后放进超净工作台，打开菌液冻存管，吸取冻存菌液，取50mL离心管置于试管架上，加入适量已加过Kan和Rif的YEP液体培养基，吸取冻存菌液，直接将移液枪枪头打入离心管中。50mL离心管放入恒温摇床，混匀。 第二天一早观察菌液。小摇菌液一般一晚便能摇起来，肉眼可见的菌液浑浊，呈黄色。

4⃣️扩大培养农杆菌

开启超净工作台紫外灯，紫外照射不少于20min，照射结束，关闭紫外灯，通风。将小摇好菌液放于试管架上， 75%乙醇消毒后放入超净工作台，同时准备灭菌后锥形瓶、已加过Kan和Rif的YEP液体培养基，将YEP液体培养基一定量倒入锥形瓶中，向其中加入小摇好菌液，封口，放入恒温摇床，200 rpm，记录时间。几个小时后，测菌液OD600。