【番茄遗传转化】从外植体制备到农杆菌侵染，番茄遗传转化实操关键步骤详解

番茄遗传转化

        做好前期准备后，外植体制备与农杆菌侵染是番茄遗传转化中连接材料与目的基因的核心桥梁，这两个环节的操作规范性直接影响转化成功率。这篇分享为大家带来全流程实操指南，精准把控每一个细节！

一、外植体制备：选对材料，规范处理

👉 外植体选取：优先选7-10日龄、子叶完全展开且颜色鲜绿的无菌苗，子叶长度以1.5-2.0cm为宜；部分再生能力强的品种可选用下胚轴作为外植体，长度约0.5-1.0cm。避免选取过大、过小、发黄或有损伤的材料。

👉 外植体切割：子叶剪成0.5cm×0.5cm小块，下胚轴切成等长小段，切面尽量平整（增加接触与诱导面积）；切割用剪刀需经常酒精灯灼烧灭菌，冷却后使用，防止交叉污染。

👉 预处理与摆放：切割后立即放入无菌培养皿，用无菌滤纸吸干表面水分；平铺于预培养基上，子叶块叶片正面向下，下胚轴小段横向摆放，避免重叠，每皿放20-25块，轻轻按压使其与培养基充分接触（力度适中，避免损伤）。

二、农杆菌培养与侵染：精准控温，规范操作

🌟 农杆菌活化：从阳性农杆菌平板上挑取单个、饱满、边缘整齐的菌落，先在含相应抗生素的LB液体培养基小规模培养排查污染；再接种于LB液体培养基（含对应抗生素），28℃、200rpm振荡培养过夜，次日按一定比例转接至新鲜培养基，继续培养至OD₆₀₀达到0.5-0.6（密切监测浓度，过高影响活力）。

🌟 侵染液制备：将培养至合适浓度的菌液离心，弃上清液，用等量侵染缓冲液重悬菌体，轻轻吹打均匀（避免剧烈振荡导致细胞破碎）。

🌟 侵染与共培养：将预培养后的外植体放入侵染液完全浸没，室温下50-60rpm轻轻振荡15-20分钟；侵染结束后取出外植体，用无菌滤纸吸干表面多余菌液；共培养基表面铺一层无菌滤纸，将外植体转移至共培养基上培养。

完成侵染与共培养后，就进入关键的筛选环节。如何通过筛选培养基获得抗性芽？关注我们，下篇为你带来筛选环节的实操要点！

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