大豆遗传转化（二）——外植体制备、共培养与筛选

大豆遗传转化种子萌发于菌液制备铺垫好了，现在我们来说最核心的 “外植体制备 + 共培养”—— 这一步直接影响转化效率，每个细节都不能错
✂️外植体制备：致伤是技术活
-萌发后的种子沿种脐切开（用无菌刀），去掉种皮
-切掉 1/2 下胚轴（留太多会影响丛生芽分化）
-子叶节附近轻划致伤（划太浅菌进不去，太深会弄死细胞，力度像 “划开苹果皮” 就行）
🔴 侵染液 + 共培养：参数要精准
-菌液制备：用 IM 培养基重悬菌体，OD620 一定要控制在 0.8~1.0（低了侵染不足，高了会毒害外植体）
-侵染：子叶节泡进菌液，室温摇床 110rpm 振荡 30min（转速别太高，不然外植体容易断）
-共培养：取出外植体放 CCM 固体培养基，25℃暗培养 5d（温度高了菌会疯长，低了转化效率低）
📌 划重点：致伤后别晾太久，立刻侵染！共培养结束后用无菌水冲一下外植体表面的残菌（轻轻冲）

共培养结束后，就到了 “筛苗” 的关键期 —— 不同阶段用对培养基，丛生芽才能顺利伸长，不然全是 “僵苗”
🌱 筛选培养：
1⃣️ 第一步（14d）：外植体 45 度角斜插进 SM3 培养基（25℃光照）—— 这个角度能让芽更好地接触培养基，避免基部腐烂
2⃣️第二步（14d）：切掉大的丛生叶，换 SM5 培养基 —— 去掉老叶能减少养分消耗，促进新芽生长
📏 伸长培养：看状态，勤继代
切掉子叶节，把丛生芽插进 SEM 培养基（25℃光照），14d 继代一次（别等芽长得太挤，会互相争夺养分）
达标标准：长到 “两叶一心”，对生真叶不发黄、不脱落（这时候的苗最健壮，适合下一步生根）
💡 小提醒：光照强度控制在 3000-5000lux，太强会灼伤幼苗，太弱会导致徒长～

关于我们：

吉农基因在大豆、小麦、玉米、番茄、烟草等作物的遗传转化上，均已建立成熟的技术体系，我们可提供从载体构建、农杆菌介导转化到阳性植株鉴定、繁种的全流程技术服务，助力植物分子机制研究快速落地。若您的团队正开展植物基因功能验证、抗性品种遗传转化等研究，欢迎随时与我们沟通。若有技术上的疑问，也非常乐意为您解答！