【番茄遗传转化】农杆菌菌株选择与质粒转化

在番茄遗传转化中，农杆菌菌株的选择与质粒转化的效率，直接影响目的基因的导入效果。今天就为大家拆解这两个核心环节的关键要点，从菌株选型到操作细节逐一讲透！

一、农杆菌菌株选择：选对菌株，成功一半

👉 常用菌株：LBA4404 或 GV3101，建议携带双元表达载体（如pBI121，含GUS报告基因和卡那霉素抗性基因）。

✅ 菌株特性匹配：LBA4404宿主范围适应性强，对番茄等茄科植物侵染能力强，Vir区基因表达稳定，适合大多数番茄品种；GV3101转化效率可能更具优势，但对部分番茄品种有宿主特异性，使用前建议先做预实验测试侵染效果。

✅ 抗生素抗性适配：不同菌株固有抗生素抗性不同，如LBA4404通常抗链霉素，GV3101抗利福平。选择培养基时需确保添加的抗生素不抑制农杆菌生长，同时能有效筛选含重组质粒的农杆菌。

二、质粒转农杆：液氮冻融法操作指南

1.  前期准备：将1μg质粒DNA加入100μL农杆菌感受态细胞，冰浴30分钟。质粒需高纯度（避免蛋白、RNA污染，琼脂糖凝胶电泳检测完整性），浓度控制在1μg左右为宜；感受态细胞从-80℃取出后立即冰上解冻，避免反复冻融。
2.  冻融与复苏：液氮速冻5分钟，37℃水浴5分钟，加入500μL无抗生素LB培养基，28℃、200-220rpm振荡培养2-4小时。注意严格控制温度和时间，液氮速冻确保细胞完全冻结，37℃复苏不超过5分钟，避免细胞损伤。
3.  筛选与验证：离心收集菌体，涂布于含相应抗生素的LB平板，28℃倒置培养。抗生素浓度需精准（预实验确定最适浓度），涂布时菌液均匀分布；培养后挑取单菌落，通过PCR鉴定或质粒提取验证，确保含正确重组质粒（设置阴阳性对照提高准确性）。

完成农杆菌与质粒的准备后，接下来就是外植体制备环节。如何选取和处理外植体才能提高转化效率？关注我们，下篇为你揭晓！

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